Tag Archives: cromatografie

Ghid de alegere a coloanei capilare in cromatografie

Cand dorim sa alegem coloana cea mai propice pentru aplicatia noastra trebuie sa vedem ce influenta pot avea tinem seama de urmatoarele:

1.       Lungimea coloanei;

2.       Diametrul intern;

3.       Grosimea filmului;

4.       Faza stationara;

5.       Gazul purtator.

Ce influenta au fiecare vedem mai jos.

Reguli/indicatii de alegere a coloanei capilare

Lungimea coloanei RECOMANDARE: In general este recomandat utilizarea unor coloane scurte deoarece: Timpul de analiza este mai scurt.

Sunt mai ieftine.

Timpul pe care analitul il petrece in coloana este scurt – nu apar efecte adverse nedorite.

Daca totusi se doreste marirea timpului de retentie – este recomandat folosirea unei coloane mai subtiri in detrimentul uneia mai lungi.

Diametrul intern

In functie de diametrul intern coloanele capilare se clasifica in:

Megabore – cu diametrul de 0,35 mm

Se recomanda injectia directa – splitless.

Recomandate pentru aplicatii de tipul – HeadSpace

Medium size column – coloane de marime medie – cu diametrul intre 0,25-0,35 mm Cele mai folosite – raport bun calitate:pret
Narrow columns – coloane inguste – cu diametrul interior de 0,10 mm Se pot folosi la lungimi mici => timp de analiza mic; insa au si limitari:

Necesar injectie split cu raport de splitare 500/1

Nu sunt foarte versatile;

Necesita gaz purtator la presiune mare;

Sunt dificil de manipulat si intretinut.

Grosimea filmului Avantajele unui film gros Creste timpul de retentie – un lucru esential in cazul analizei COV

Creste „capacitatea coloanei” – poate pastra o cantitate mare de analit.

Elutia de pe coloana se face la temperaturi mai ridicate – se reduce efectul de absorbtie – denumite „warmer column”.

Avantajele unui film sibtire Separare maxima

Elutia de pe coloana se face la temperaturi joase – sunt denumite „cooler column”

Sunt coloane rapide =>timp de analiza scazut

Faza stationara Nepolara Eficienta si relativ inerta.

Utila pentru majoritatea probelor;

Se pot folosi temperaturi mai mici – stabilitate mai mare pentru substantele termosensibile.

Nu foarte selectiva insa.

Polara Selectivitate mare
Gazul purtator Hidrogen Separarea putin mai buna ca si in cazul He.

Daca se foloseste modul de analiza izoterm timpul de analiza se reduce cam la jumatate fata de He.

Picuri mai ascutiti.

Se pot folosi temperaturi mai joase => creste durata de viata a coloanei.

Marele dezavantaj este fatul ca H este EXPLOZIV.

Heliu Preferat de majoritatea celor ce folosesc coloane capilare.

Injectorul split/splitless

Injectorul split/splitless

Principiul de functionare a unui injector de gaz cromatografie split/splitless.

Un asemenea injector poate functiona in doua moduri:

  • Split – toata proba ajungein coloana.
  • Splitless – doar o fractie din proba ajunge in coloana.

Schema unui injector split/splitless – vezi figura de mai jos.

Schema unui injector split/splitless

Unde:

1, 2, 3 – sunt valve controlate electronic.

Valva 1 regleaza debitul de gaz purtator ce vine de la butelie.

Valva 2 (de obicei la debit constant ≈3 ml/minut) evacueaza gazele ce se aduna sub septumul de cauciuc pentru a indeparta eventualele interferente.

Valva 3 in modul split controleaza fractia de proba amestecata cu gaz purtator ce intra in coloana,  in modul splitless e inchisa,

Invelisul metalic – se poate incalzi electric pana la 400-450 oC pentru a vaporiza probele lichide.

Tubul de sticla – locul unde are loc vaporizarea probelor lichide introduse.

Functionarea injectorului in modul split

In acest mod de functionare sunt deschise toate valvele.

Proba se introduce in partea de sus a injectorului (in zona galbena).  In continuare are loc vaporizarea probei. Vapori de proba sunt preluati de gazul purtator si dusi catre coloana.

Deschiderea valvei 3 este controlata de calculator  in asa fel incat sa se obtina raportul de splitare dorit (de exemplu 1:10 – 1 parte de proba intra in coloana, 10 parti sunt purjate afara prin iesire split).

Avantajele injectiei split este ca se obtin picuri mai bine separate si mai inguste.

Functionarea injectorului in modul splitless

In acest mod de functionare sunt deschise valvele 1 si 2, valva 3 este inchisa complect.

Ca si la modul split  proba se introduce in partea de sus a injectorului (in zona galbena).  In continuare are loc vaporizarea probei. Vapori de proba sunt preluati de gazul purtator si dusi catre coloana.

In cazul modului splitless valva 3 este inchisa complect astfel ca toata proba ajunge in coloana.

Este un mod de injectie bun pentru probe gazoase (tehnica Head-Space), dar da rezultate mai slabe (picuri mai largi si mai turtite) pentru injectia lichidelor.